
ELISA檢測原理是什么?
ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一種廣泛應(yīng)用于臨床檢驗和科研中的生物化學(xué)技術(shù)。其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng),并通過酶催化底物顯色來定性或定量地檢測目標物質(zhì)。
ELISA主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)和競爭法四種類型:
1. 直接法:將待測抗原固定在固相載體上,加入針對該抗原的酶標抗體,經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合部分后,再加底物顯色。此方法簡單快速但靈敏度較低。
2. 間接法:先讓待測樣本中的特異性抗體與包被于反應(yīng)板上的已知抗原相結(jié)合,然后用酶標記的二抗識別并結(jié)合這些一抗,最后通過加入底物使顏色變化來判斷結(jié)果。這種方式提高了檢測敏感性和靈活性。
3. 夾心法(雙抗體夾心法):適用于測定含有兩個以上相同或不同表位的大分子抗原。首先將一種特異性抗體固定在固相載體上作為捕獲抗體,待測樣本中的目標抗原與之結(jié)合形成復(fù)合物;隨后加入另一種特異性的酶標記抗體,即檢測抗體,它能識別并結(jié)合到已經(jīng)形成的免疫復(fù)合物上的另一表位,最終通過底物顯色來確定目標抗原的存在及其濃度。
4. 競爭法:當待測物質(zhì)為小分子或多肽時常用此方法。原理是將已知量的酶標抗原與未知量的非標記抗原競爭性地結(jié)合到有限數(shù)量的抗體位點上,通過比較兩者之間的差異來推算出樣品中目標物的含量。
ELISA技術(shù)因其操作簡便、特異性強、靈敏度高和適用范圍廣等特點,在臨床診斷領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
ELISA主要分為直接法、間接法、夾心法(雙抗體夾心法)和競爭法四種類型:
1. 直接法:將待測抗原固定在固相載體上,加入針對該抗原的酶標抗體,經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合部分后,再加底物顯色。此方法簡單快速但靈敏度較低。
2. 間接法:先讓待測樣本中的特異性抗體與包被于反應(yīng)板上的已知抗原相結(jié)合,然后用酶標記的二抗識別并結(jié)合這些一抗,最后通過加入底物使顏色變化來判斷結(jié)果。這種方式提高了檢測敏感性和靈活性。
3. 夾心法(雙抗體夾心法):適用于測定含有兩個以上相同或不同表位的大分子抗原。首先將一種特異性抗體固定在固相載體上作為捕獲抗體,待測樣本中的目標抗原與之結(jié)合形成復(fù)合物;隨后加入另一種特異性的酶標記抗體,即檢測抗體,它能識別并結(jié)合到已經(jīng)形成的免疫復(fù)合物上的另一表位,最終通過底物顯色來確定目標抗原的存在及其濃度。
4. 競爭法:當待測物質(zhì)為小分子或多肽時常用此方法。原理是將已知量的酶標抗原與未知量的非標記抗原競爭性地結(jié)合到有限數(shù)量的抗體位點上,通過比較兩者之間的差異來推算出樣品中目標物的含量。
ELISA技術(shù)因其操作簡便、特異性強、靈敏度高和適用范圍廣等特點,在臨床診斷領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
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