常用的抗血清純化方法有哪些?
在臨床上,抗血清的純化是制備高特異性、高效價抗體的重要步驟。常用的抗血清純化方法包括:
1. 鹽析法:利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度差異來實現(xiàn)分離,最常用的是硫酸銨沉淀法。
2. 凝膠過濾層析:根據(jù)分子量大小的不同將目標蛋白與其它小分子物質(zhì)分開。當混合物通過凝膠柱時,大分子無法進入凝膠顆粒內(nèi)部而較快流出;相反地,小分子可以擴散至凝膠孔隙中,移動速度較慢,從而實現(xiàn)分離。
3. 離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的不同進行分離。選擇合適的離子交換劑,在特定pH條件下使目標蛋白與其他雜質(zhì)分開。
4. 親和層析:利用抗原-抗體之間的特異性結(jié)合原理,將某種配體(如抗原、抗體等)固定在固相支持物上形成親和介質(zhì),當含有目的蛋白質(zhì)的樣品流經(jīng)此介質(zhì)時,目的蛋白質(zhì)會被特異地吸附下來,其他非目標成分則被洗脫掉。
5. 超濾法:通過半透膜技術(shù)去除小分子雜質(zhì),并濃縮目標蛋白。適用于大體積樣本處理以及初步純化過程。
這些方法可以單獨使用也可以組合起來提高抗血清的純度和回收率。具體選擇哪種方法取決于實驗目的、設備條件及成本考慮等因素。
1. 鹽析法:利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度差異來實現(xiàn)分離,最常用的是硫酸銨沉淀法。
2. 凝膠過濾層析:根據(jù)分子量大小的不同將目標蛋白與其它小分子物質(zhì)分開。當混合物通過凝膠柱時,大分子無法進入凝膠顆粒內(nèi)部而較快流出;相反地,小分子可以擴散至凝膠孔隙中,移動速度較慢,從而實現(xiàn)分離。
3. 離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的不同進行分離。選擇合適的離子交換劑,在特定pH條件下使目標蛋白與其他雜質(zhì)分開。
4. 親和層析:利用抗原-抗體之間的特異性結(jié)合原理,將某種配體(如抗原、抗體等)固定在固相支持物上形成親和介質(zhì),當含有目的蛋白質(zhì)的樣品流經(jīng)此介質(zhì)時,目的蛋白質(zhì)會被特異地吸附下來,其他非目標成分則被洗脫掉。
5. 超濾法:通過半透膜技術(shù)去除小分子雜質(zhì),并濃縮目標蛋白。適用于大體積樣本處理以及初步純化過程。
這些方法可以單獨使用也可以組合起來提高抗血清的純度和回收率。具體選擇哪種方法取決于實驗目的、設備條件及成本考慮等因素。
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