方法名稱(chēng): 靈芝子珍珠口服液—腺苷的測(cè)定—高效液相色譜法
應(yīng)用范圍: 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定靈芝子珍珠口服液中腺苷的含量。
本方法適用于靈芝子珍珠口服液。
方法原理: 取供試品加甲醇,超聲處理,放置待沉淀完全,濾過(guò),取許濾液蒸干,殘?jiān)铀芙?,以水飽和的正丁醇提取,正丁醇提取液蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解并定容,搖勻,作為供試品溶液。注入高效液相色譜儀,以紫外檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm,記錄腺苷的響應(yīng)值,計(jì)算其含量。
試劑: 1. 甲醇
2. 正丁醇
儀器設(shè)備: 1 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
Hypersil C18 (250 ×4.6mm, 5μm)。
1.3紫外檢測(cè)器
2 色譜條件
2.1 流動(dòng)相: 甲醇 磷酸鹽緩沖液(pH 6.5) = 10 1
2.3 柱溫:30℃
2.4 檢測(cè)波長(zhǎng):260nm
2.5 流速:1.0mL/min
試樣制備: 1. 對(duì)照品溶液的制備
精密稱(chēng)取腺苷對(duì)照品適量,加甲醇配制成1mL含40μg的對(duì)照品溶液。
2. 供試品溶液的制備
取供試品20mL置100mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻超聲處理5分鐘,放置待沉淀完全,濾過(guò),取許濾液50mL蒸干,殘?jiān)铀?0mL溶解,以水飽和的正丁醇提取4次,合并正丁醇提取液蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解并定容至5mL,搖勻,作為供試品溶液。
注:“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。
操作步驟: 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制
精密吸取上述對(duì)照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外檢測(cè)器檢測(cè)器,于260nm檢測(cè)腺苷的吸收值,以腺苷的進(jìn)樣量對(duì)其峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得到回歸方程。
2. 供試品的測(cè)定
精密吸取上述供試品溶液10μL,注入高效液相色譜儀,以紫外檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm,記錄腺苷的響應(yīng)值,計(jì)算其含量。
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