大量食物易殘留組胺類藥物，對(duì)人體有一定危害。目前對(duì)于普通政府質(zhì)檢機(jī)構(gòu)、獸藥監(jiān)察所、商檢局等，以及食品企業(yè)：農(nóng)畜產(chǎn)品加工出口企業(yè)、水產(chǎn)企業(yè)、蜂蜜企業(yè)等大眾基層實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)用最多的是酶連免疫吸附試劑盒方法，即ELISA方法。

ELISA方法相比較于儀器檢測(cè)具有靈敏度高、檢測(cè)成本低、快速方便，可同時(shí)大批量篩選，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，因此舉例：

儀器和試劑

1.1 儀器

(a)色譜管——200×7mm（內(nèi)徑）聚丙烯管，配有Kontes No.K-422,372Kel-F卡套和約45cm聚四氟乙烯管，以調(diào)節(jié)與柱相連的出口管高度，控制流速大于3ml/min。或用二通閥 （生物實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品）代替管子。

(b)熒光計(jì)——Perkin-Elmer型203或204,帶中壓汞燈?；驇в性?50nm激發(fā)光和在444nm測(cè)量發(fā)射光的儀器。

(c)重?fù)Q移液管——1和5ml。

1.2 試劑

(a)離子交換樹脂——Bio-Rad AG/-X8 50—100目?；駾owex 1-X8 50—100目，以約15ml 2M NaOH/g樹脂加入燒杯，使其轉(zhuǎn)變?yōu)?mdash;OH形式，旋搖混合，靜置30min。倒出液體并加堿重復(fù)操作。用水洗透樹脂，糊狀物倒進(jìn)折疊濾紙，再用水洗。每周制備新樹脂并浸在水中保存。

在管(a)底塞上玻璃棉，填入足以形成8cm樹脂床層的糊狀物，無論何時(shí)，都須使樹脂層上保留水層。再生樹脂，不在填充柱內(nèi)進(jìn)行，需要時(shí)，可在燒杯里分批再生，每次提取前，用約10ml水洗柱。

(b)磷酸——1.19M。稀釋121.8ml、85%的H3PO4至1L。如用其他濃度磷酸，配1L 1.19M的H3PO4所需體積V=17493/（密度H3PO4×%H3PO4)。標(biāo)定；吸取5ml H3PO4,以酚酞為指示劑用1.00M NaOH滴定至終點(diǎn)。如需要，可調(diào)整濃度。

(c)鄰苯二甲酸二碳基乙醛(OPT)溶液——0.1%。100mg OPT溶于100ml、經(jīng)玻璃容器蒸餾過的甲醇中，裝在棕色瓶中，于冰箱內(nèi)貯存，每周新配。

(d)組胺標(biāo)準(zhǔn)溶液——冰箱里貯存。⑴貯備液——1mg/ml。無堿性。準(zhǔn)確稱取約169.1mg組胺·2HCl(98%）于100ml容量瓶中，用0.1M HCl溶解并稀釋到刻度，每周新配。⑵中間溶液——10μg/ml。吸取1ml貯備液放進(jìn)100ml容量瓶，用0.1M HCl稀釋到刻度，每周新配。⑶工作溶液——0.5,1.0和1.5μg/5m1。吸取1,2和3ml中間溶液，分別于100ml容量瓶中，各用0.1M HCl稀釋至刻度，每天新配。

試驗(yàn)過程

（使用前，以HCl(1 3)和水洗滌全部塑料及玻璃容器）

2.1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取平行的各標(biāo)準(zhǔn)工作液5ml于50ml的玻璃或聚丙烯錐形瓶中，各瓶加10ml 0.1M的HCl并混勻。加入3ml 1M NaOH并混勻；在5min內(nèi)，加入1ml OPT溶液并立即混合；準(zhǔn)確于4min后，加入3ml 1.19M H3PO4并立即混勻。每次加液后，至少在OPT反應(yīng)期間（順序加入試劑到一組錐型瓶里，可同時(shí)進(jìn)行6—10個(gè)OPT反應(yīng)），充分混勻是很重要。用5ml 0.1M HCl代替組胺溶液作為空白，在1.5h內(nèi)，以水為參比記錄工作標(biāo)準(zhǔn)液的熒光強(qiáng)度(I)，用350nm吸收波長(zhǎng)，和444nm發(fā)射波長(zhǎng)，以(I)（經(jīng)空白校正）對(duì)μg組胺/5ml試樣作圖。

2.2.測(cè)定

用甲醇萃取按17-28C,第一節(jié)中制得的樣品。用4—5ml水洗柱，(a)，棄流出液。吸1ml萃取液加進(jìn)柱內(nèi)并加4—5ml水。立即使柱流出液進(jìn)入50ml、內(nèi)含5.00ml 1.00M HCl的容量瓶中，當(dāng)液面在樹脂上方約2mm處時(shí)，加入約5ml水洗脫，接著用大量水洗脫，直到約有35ml洗脫液為止。停止柱流，用水稀釋到瓶的刻度，塞上瓶蓋混勻，冷藏洗脫液。

吸5ml洗脫液于50ml錐型瓶中，吸取10ml 0.1M HC1加入，按C,自"吸加3ml 1M NaOH"開始進(jìn)行。

如樣品含量大于15mg組胺/100g魚，吸取1ml樣品-OPT混合液于10ml、盛有準(zhǔn)確2ml空白-OPT混合液的燒杯中，充分混勻。讀出新溶液的熒光強(qiáng)度，如想得到可測(cè)的讀數(shù)，就用空白-OPT的混合液稀釋試樣。這個(gè)近似值表明，為準(zhǔn)確地定量樣品，進(jìn)行第二次OPT反應(yīng)前，要將洗脫液作適當(dāng)稀釋。此外，調(diào)節(jié)熒光計(jì)的靈敏度范圍（如儀器有此裝置）來估計(jì)稀釋倍數(shù)。利用這些近似值，用0.1M HCl制備洗脫液的適當(dāng)稀釋試樣。按C進(jìn)行。

2.3.計(jì)算

繪制I對(duì)μg組胺/5ml溶液（用繞度（偏轉(zhuǎn)）計(jì)或記錄儀響應(yīng)測(cè)量并經(jīng)空白校正過的圖應(yīng)是一條過原點(diǎn)的直線，斜率=m=[(Ia/1.5)十Ib十2Ic]/3mg組胺/100g魚=⑽(F)(1/m)(Is)

式中：Is、Ia、Ib、Ic分別為樣品、1.5、1.0和0.5mg組胺標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度。F=稀釋倍數(shù)=ml洗脫液十ml 0.1M HCl/ml洗脫液，未稀釋的洗脫液F=1

如果校正圖形呈非線性，直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。橫座標(biāo)上每一分度應(yīng)≤0.1μg組胺/5ml溶液，從曲線最靠近0.05μg組胺/5ml溶液處，讀出所有值。

mg組胺/100g魚=⑽(F)(W)

式中：W=μg組胺/100e魚（用標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得）檢測(cè)下限

紅葡萄酒 -------------------------1.0ppm

碳酸飲料 -----------------------------0.5ppm

牛奶 -----------------------------0.5ppm

酸奶、凝乳、奶酪、魚--------------2.5ppm

回收率魚類組胺添加為5–50ppm和500ppm -----------------------80–95%

紅葡萄酒組胺添加為10ppm和50ppm ----------------------85–115%

牛奶組胺添加為100ppm --------------------------------90–110%

其它樣品在不同的含量峰值水平 ------------------------75–120%