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自動化免疫分析技術(shù)的新進展

2009-10-28 11:35 來源:
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  免疫分析技術(shù)具有高度的準確性和特異性,因而在臨床檢驗領(lǐng)域中倍受重視,發(fā)展迅速,成為檢驗方法中最為重要的技術(shù)之一。隨著抗體和抗原制備技術(shù)的成熟及標記技術(shù)的發(fā)展和完善,免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛應(yīng)用于機體免疫功能、腫瘤標志物、內(nèi)分泌功能、傳染性疾病、治療藥物監(jiān)測、過敏原檢測等體外診斷實驗中,其中血凝技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附實驗技術(shù)、放射免疫分析技術(shù)、熒光免疫分析及膠體金技術(shù)等已被大量地應(yīng)用于檢驗科的日常工作中。

  由于臨床檢驗工作量不斷增加,疾病傳染性對工作人員構(gòu)成的危險因素加大,同時對工作效率要求越來越高,因此對檢驗自動化要求越迫切。七十年代起自動生化分析儀開始出現(xiàn)在臨床實驗室,到了九十年代免疫分析技術(shù)已日趨成熟,熒光偏振、時間分辯熒光、電化學(xué)發(fā)光等分析技術(shù)不斷引入到免疫分析系統(tǒng),這些免疫分析技術(shù)不但有較高靈敏度,而且特異性也較好,具有一定的抗干擾能力。

  1、熒光偏振(FPIA):用熒光素標記的示蹤物與分析物的復(fù)合體經(jīng)單一平面偏振光照射后,可發(fā)出單一平面的偏振熒光,此熒光在特定偏振面的強度與復(fù)合體受激發(fā)時的轉(zhuǎn)動速度成反比,而轉(zhuǎn)動速度與分子量的大小成反比。當熒光標記的示蹤物與分析物的復(fù)合體結(jié)合后,分體對相應(yīng)大分子抗體進行競爭性結(jié)合,使游離的復(fù)合體增多,而復(fù)合體轉(zhuǎn)動速度較高,這樣在特定偏振面上檢測到的熒光強度較低,反之檢測到的熒光強度就會較高。因此通過檢測在特定偏振面上的熒光強度的高低就可得到待檢血清中分析物的濃度。這種方法的優(yōu)點是靈敏高,線性范圍廣,有較好的精確度。此項技術(shù)的專利已被雅培公司買斷,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理他們生產(chǎn)的IMX、AXSYM免疫分析系統(tǒng)均采用此種原理的免疫分析系統(tǒng)。

  2、時間分辯熒光(TRFIA):這是由芬蘭EG&G公司生產(chǎn)的自動免疫分析儀率先采用的檢測原理。原理和熒光免疫分析基本相同,只是標記物和信號的測量不同。采用三價稀土離子做示蹤劑,如:EU3+,SM3+等。稀土離子通過螯合劑與抗體分子上的游離氨基共價結(jié)合,形成稀土離子-螯合劑-抗體標記螯合物,用建立雙抗體夾心免疫分析。當采用酸性增強液將稀土離子從免疫復(fù)合物中解離出來,并與增強液中的主要成份形成微囊,當被激發(fā)光激發(fā)后,稀土離子可以發(fā)出長壽命的極強的熒光信號。主要優(yōu)點為1、由于稀土離子熒光激發(fā)光波長范圍寬,發(fā)射光波窄,激發(fā)光和發(fā)射光之間有較大的位移,因此有利于提高激發(fā)能。排除非特異熒光干擾,增強熒光信號的特異性。2稀土離子標記螯合物具有較高的穩(wěn)定性,標記離子不易脫落,穩(wěn)定期可達1-2年。3、由于稀土離子螯合物所產(chǎn)生的熒光不僅強度高,而且壽期長,因此利用延緩測量時間,可以排除待測樣本或試劑中短壽合的自然熒光干擾。

  3、電化學(xué)發(fā)光(ECL):基本原理與化學(xué)發(fā)光相同,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理與普通化學(xué)發(fā)光技術(shù)的不同在于采用特殊的標記物:聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy))2+.在三丙胺陽離子自由(TPA+)的催化及脈沖電壓的激發(fā)下,此標記物可產(chǎn)生高效、穩(wěn)定的邊續(xù)發(fā)光。同時,由于(Ru(bpy))2+.在反應(yīng)中可循環(huán)利用,使發(fā)光得以增強和穩(wěn)定。這種方法的主要優(yōu)點是標記物分子小且穩(wěn)定性較好,發(fā)光強度高,發(fā)光時間長。德國寶靈曼公司ELECSYS系列的自動免疫分析儀就是采的電化學(xué)發(fā)光原理。

  4、增強化學(xué)發(fā)光(EC):將生物素化的(Biotinylated)第一抗體通過親合素(Streptavidin)包被于反應(yīng)杯內(nèi)表面上,當待測物與之結(jié)合后,再加入用辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)標記的第二抗體,與普通化學(xué)發(fā)光原理不同之處是采用了一種特殊的催化劑與發(fā)光醇(Luminol)及其它試劑一道加入后,可使辣根過氧化物酶氧化發(fā)光醇的反應(yīng)速度提高103倍以上。從而使方法學(xué)的靈敏度大大提高。美國強生公司擁有一種特殊增強劑的專利,并新推出的VITROS Eci全自動免疫分析儀。

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