熒光抗體的鑒定內(nèi)容是檢驗主管技師考試輔導的部分內(nèi)容,以下是醫(yī)學教育網(wǎng)對這塊內(nèi)容的整理,希望對考生有所幫助:
熒光抗體在使用前應(yīng)加以鑒定。鑒定指標記包括效價及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率。抗體效價可以用瓊脂雙擴散法進行滴定,效價大于1:16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率(F/P)的測定和計算的基本方法是:將制備的熒光抗體稀釋至A2801≈1.0,分別測讀A280 (蛋白質(zhì)特異吸收峰)和標記熒光素的特異吸收峰,按公式計算。
F/P值越高,說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多,反之則越少。一般用于固定標本的熒光抗體以F/P=1.5為宜,用于活細胞染色的以F/P=2.4為宜。
抗體工作濃度的確定方法類似ELISA間接法中酶標抗體的滴定。將熒光抗體自1:4~1:256倍比稀釋,對切片標本作熒光抗體染色。以能清晰顯示特異熒光、且非特異染色弱的最高稀釋度為熒光抗體工作濃度。
熒光抗體的保存應(yīng)注意防止抗體失活和防止熒光猝滅。最好小量分裝,-20℃凍存,這樣就可放置3~4年。在4℃中一般也可存放1~2年。