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隱孢子蟲卵囊染色檢查

2009-09-27 16:07 來源:
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  目前最常用的方法是金胺-酚改良抗酸染色法,該法是采用金胺-酚染色法和改良抗酸染色法復(fù)染,以提高檢出率和準(zhǔn)確性。單用金胺-酚染色法或改良抗酸染色法,其效果均不如復(fù)染方法。檢查時(shí),取患者腹瀉的新鮮糞便或經(jīng)10%福爾馬林固定保存(4℃1個(gè)月內(nèi))糞便,自然沉淀后用吸管盡可能取底部糞便,于載玻片上涂成糞膜,晾干后先用金胺-酚染色,再用改良抗酸染色法復(fù)染。

  (一)金胺-酚染色法

  1.染液配制

  lg/L金胺-酚染色液(第一液):金胺1g,石炭酸5.0g,蒸餾水100ml;3%鹽酸酒精(第二液):鹽酸3ml,95%酒精100ml;高錳酸鉀液(第三液):高錳酸鉀0.5g,蒸餾水100ml。

  2.染色步驟

  滴加第一液于晾干的糞膜上,10~15分鐘后水洗;滴加第二液,1分鐘后水洗;滴加第三液,1分鐘后水洗;待干后置熒光顯微鏡下觀察。

  低倍熒光顯微鏡下,可見卵囊為一圓形小亮點(diǎn),呈現(xiàn)乳白色熒光。高倍鏡下卵囊呈乳白或略帶綠色,卵囊壁為一薄層,多數(shù)卵囊周圍深染,中央淡染,似環(huán)狀;或深染結(jié)醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理構(gòu)偏位,有些卵囊全部為深染;但有些標(biāo)本可出現(xiàn)非特異的熒光顆粒,應(yīng)注意鑒別。

  (二)改良抗酸染色法(modifieD acid-faststain)

  1.染液配制

  石炭酸復(fù)紅染色液(第一液):堿性復(fù)紅4g,95%酒精20ml,石炭酸8ml,蒸餾水100ml;10%硫酸溶液(第二液):純硫酸10ml,蒸餾水90ml(邊攪拌邊將硫酸徐徐傾人水中);20g/L孔雀綠液(第三液):20g/L孔雀綠原液1ml,蒸餾水10ml。

  2.染色步驟

  滴加第一液于糞膜上,1.5~10分鐘后水洗;滴加第二液,1~10分鐘后水洗;滴加第三液,1分鐘后水洗;待干后置顯微鏡下觀察。染色后,卵囊為玫瑰紅色,圓形或橢圓形,背景為綠色。染色(1.5分鐘)和脫色(2分鐘)時(shí)間短,卵囊內(nèi)子孢子邊界不明顯;染色時(shí)間長(5~10分鐘),脫色醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理時(shí)間相應(yīng)延長時(shí),子孢子邊界明顯,卵囊和子孢子均被染成玫瑰紅色,子孢子呈月牙形,共4個(gè),其他非特異顆粒則染成藍(lán)黑色,容易與卵囊區(qū)分。

  不具備熒光顯微鏡的實(shí)驗(yàn)室,可染色后先在光鏡低、高倍鏡下過篩檢查,見有小紅點(diǎn)時(shí)再轉(zhuǎn)用油鏡觀察,這樣可提高檢出速度和準(zhǔn)確性。

  (三)金胺-酚改良抗酸染色法

  先用金胺-酚染色后,再用改良抗酸染色法復(fù)染,然后置光鏡下觀察。卵囊同改良抗酸染色法所見,但非特異性顆粒被染成藍(lán)黑色,兩者顏色顯然不同,極易區(qū)別,使檢出率和準(zhǔn)確性都明顯提高。

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