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根據(jù)便秘的病史和腹脹等體征，結(jié)合指診，確診并不困難，但必要時仍需下列檢查協(xié)助證實。

1.鋇劑灌腸X線檢查，可見無神經(jīng)節(jié)細胞腸段發(fā)生痙攣狹窄，狹窄區(qū)長度從肛門起向上延展，可達乙狀結(jié)腸、降結(jié)腸，有的甚至達脾曲或橫結(jié)腸。在狹窄段之近心端則可見異常擴張的結(jié)腸，此即為擴大段。有時位于2段之間，顯示清晰的漏斗狀影相。但在短段型病例中，由于狹窄段為6.0～7.Ocm或更短，X線檢查多看不到狹窄段，似乎從肛門上開始，直腸立即擴張。拔除肛管之后，鋇劑不能自動排空。經(jīng)24～48h后再透視，仍可見到多量的鋇劑潴留于擴大的結(jié)腸內(nèi)。

2.組織化學檢查法對診斷有疑問時，可采取直腸表面黏膜活檢，進行乙酰膽堿脂酶組織化學染色檢查。先天性巨結(jié)腸癥的腸黏膜下層乙酰膽堿脂酶增多，可見增生的乙酰膽堿脂酶強陽性染色的副交感神經(jīng)纖維；而正常的直腸黏膜為陰性，具體方法見新生兒、嬰幼兒巨結(jié)腸節(jié)。

3.直腸內(nèi)壓測定法和直腸活體檢查，對診斷本病都有重要價值。請參閱新生兒、嬰幼兒巨結(jié)腸節(jié)。