過碘酸鹽氧化法：

本法只用于HRP的交聯。該酶含18%碳水化合物，過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質結合，形成按摩爾比例結合的酶標結合物。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯最有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈，各批實驗結果不易重復。

按以上方法制備的結合物一般混有未結合的酶和抗體。理論上結合物中混有游離酶不影響ELISA 中最后的酶活性測定，因經過洗滌，非特異性吸附于固相上的游離酶已被洗去。但游離的抗體則會與酶標抗體競爭相應的固相抗原，因而減低結合到固相上的酶標抗體量。因此制備的結合物應予以純化。醫(yī)|學教育網搜集整理純化的方法較多，分離大分子混合物的方法均可應用。硫酸銨鹽析法操作簡便，但效果不如用sephadexg-200凝膠過濾的好。