用高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫鉀6.8g與氫氧化鉀液（0.1mol/L）70ml、加水稀釋成約850ml并調(diào)節(jié)pH至6.3±0.1，加甲醇80ml，用水稀釋成1000ml的溶液為流動相；檢測波長為254nm.葉酸峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備

取煙酰胺適量，加水溶解并稀釋成每1ml中含1.0mg的溶液，搖勻，即得。

測定法

取葉酸對照品約5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加0.5％氨溶液約15ml溶解，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品，同法測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。