方法名稱：

精蛋白重組人胰島素注射液—重組人胰島素的測(cè)定—效價(jià)測(cè)定

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定精蛋白重組人胰島素注射液中重組人胰島素的含量。

本方法適用于精蛋白重組人胰島素注射液。

方法原理：

供試品制成鹽酸溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)214nm處檢測(cè)重組人胰島素的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 異丙醇

2. 0.2mol/L硫酸鹽緩沖液

3. 0.01mol/L鹽酸溶液

4. 9.6mol/L鹽酸溶液

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑（5-10μm）。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙腈＋硫酸鹽緩沖液=26＋74

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 0.2mol/L硫酸鹽緩沖液

無(wú)水硫酸鈉28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7mL、水800mL，用乙醇胺調(diào)節(jié)pH值至2.3，加水至1000mL。

2. 稱取供試品

精密量取本品適量。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取重組人胰島素對(duì)照品適量，用0.01mol/L鹽酸溶液制成每1mL含1.0mg的溶液，并室溫放置至少24小時(shí)。

4. 供試品溶液的制備

供試品每1mL中加9.6mol/L鹽酸溶液3μL，使其完全澄清，精密量取適量，加0.01mol/L鹽酸溶液定量稀釋成每1mL含10單位的溶液（臨用新配），混勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)214nm處測(cè)定重組人胰島素的吸收值，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.416。