方法名稱： 甲氨蝶呤片－甲氨蝶呤－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定甲氨蝶呤片中甲氨蝶呤的含量。

本方法適用于甲氨蝶呤片。

方法原理： 供試品研細(xì)后，經(jīng)流動(dòng)相溶解并定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長302nm處檢測甲氨蝶呤的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑： 1. 乙腈

2. 7.0%枸櫞酸溶液

3. 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液

儀器設(shè)備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按甲氨蝶呤峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙腈 7.0%枸櫞酸溶液 2.0%無水磷酸氫二鈉溶液=10 10 80

2.2 檢測波長：302nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取甲氨蝶呤對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于甲氨蝶呤2.5mg），置25mL量瓶中，加流動(dòng)相20mL，超聲處理使甲氨蝶呤溶解，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長302nm處測定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面積，計(jì)算出其含量。