方法名稱(chēng)： 荷丹片－荷葉堿的測(cè)定－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定荷丹片中荷葉堿的含量。

本方法適用于中成藥荷丹片。

方法原理： 本品加三氯甲烷加熱回流，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓瑸V過(guò)，取續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)270nm處檢測(cè)荷葉堿的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑： 1. 三氯甲烷

2 .乙腈

3 .三乙胺

4 .冰醋酸

5 .濃氨試液

儀器設(shè)備： 1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按荷葉堿計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2色譜條件

2.1流動(dòng)相：乙腈 三乙胺 冰醋酸 水=27 1.8 0.78 70.6

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm

2.3柱溫：室溫

試樣制備： 1. 稱(chēng)取供試品

取本品10片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約0.4g，精密稱(chēng)定，為供試品。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取荷葉堿對(duì)照品適量，加乙醇制成每1mL含16mg的溶液。

3. 供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約0.4g，精密稱(chēng)定，用濃氨試液5mL濕潤(rùn)，加三氯甲烷60mL，加熱回流3小時(shí)，放冷，移至分液漏斗中，分取三氯甲烷層，余留物再用三氯甲烷25mL分3次振搖提取，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干，殘?jiān)靡掖既芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加乙醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)270nm處測(cè)定荷葉堿（C19H21NO3）的峰面積，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p554。